牛肺疫抗體（ECP Ab）酶聯免疫分析試劑盒

發布時間： 2019/6/18　　點擊次數： 1507次

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牛肺疫抗體（ECP Ab）酶聯免疫分析試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍： 96T

使用目的：本試劑盒用于測定牛血清樣本中肺疫抗體（ECP Ab）表達。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中牛肺疫抗體（ECP Ab）表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中肺疫抗體（ECP Ab）相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的抗原結合，形成抗原-抗體-酶標抗原復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中牛肺疫抗體（ECP Ab）的存在與否。

試劑盒組成

牛肺疫抗體（ECP Ab）酶聯免疫分析試劑盒標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉）。
測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

牛肺疫抗體（ECP Ab）酶聯免疫分析試劑盒計算和結果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為肺疫抗體（ECP Ab）陰性

陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為肺疫抗體（ECP Ab）陽性

操作程序總結：