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    質(zhì)控菌株及其保存與應(yīng)用

    發(fā)布時(shí)間: 2011/4/28  點(diǎn)擊次數(shù): 2043次
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    質(zhì)控菌株及其保存與應(yīng)用

    一.菌種保存
    保存菌種用的培養(yǎng)基必須能維持使微生物長期生存且不出現(xiàn)生長或新陳代謝過于旺盛的情況,菌株能較長時(shí)間存活且保持性狀穩(wěn)定。
    1.菌種保存的注意事項(xiàng)
    (1)不能用含有可發(fā)酵性糖的培養(yǎng)基保存菌種。
    (2)不可以使用選擇性培養(yǎng)基,不能從藥敏試驗(yàn)平板培養(yǎng)基上留取菌株。
    (3)不可使培養(yǎng)菌干枯,所有試管要保持良好的密封性。
    (4)對(duì)溫度變化敏感的細(xì)菌,如淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌,不可貯存于冰箱,但可用快速冷凍干燥法長期保存。
    (5)作為抗菌藥物敏感試驗(yàn)用的標(biāo)準(zhǔn)菌株,由保存狀態(tài)取出后,不能連續(xù)使用1 周以上,應(yīng)定期傳代,但一般不超過6 次,必要時(shí)進(jìn)行更換。
    2.菌種保存的方法
    保存菌種的方法,應(yīng)根據(jù)菌種的類型和保存目的進(jìn)行選擇,一般包括以下幾種方法:
    (1)培養(yǎng)基保存法:此法不需要特殊設(shè)備,并可隨時(shí)提供使用,為常用的一種保存方法,其缺點(diǎn)是易發(fā)生變異。營養(yǎng)要求不高的細(xì)菌,可用半固體保存法,一般2~3月轉(zhuǎn)種1次,并檢查菌株特性,如特性已改變,則需丟棄。特殊培養(yǎng)要求的細(xì)菌,如流感嗜血桿菌可接種巧克力瓊脂斜面,密封后冰箱貯存,每2周轉(zhuǎn)種1次。淋病奈瑟菌保存于巧克力瓊脂,每天或隔天轉(zhuǎn)種1 次,不宜4 ℃冰箱保存,因易死亡。
    (2)快速冷凍法:將純培養(yǎng)細(xì)菌在液體培養(yǎng)基上增菌后,取數(shù)個(gè)新鮮菌落加入含小牛血清或脫纖維綿羊血的培養(yǎng)基內(nèi)制成濃菌懸液,再放人無菌玻璃珠,將此瓶放入-30℃以下低溫冰箱保存。需要時(shí)用無菌鑷子取出1 粒玻璃珠置增菌培養(yǎng)液中,增菌培養(yǎng)后即可獲得新鮮菌種。用此方法,大部分細(xì)菌可保存6 ~12 月,甚至更長時(shí)間。
    (3)冷凍干燥法:是菌種保存*方法,可以免去細(xì)菌因頻繁傳代而造成菌種污染、變異和死亡。此法需冷凍干燥設(shè)備,操作較費(fèi)時(shí),但適用于需要長期保存的菌種。
    三.菌種管理
    (1)實(shí)驗(yàn)室保存菌種需按規(guī)定時(shí)間轉(zhuǎn)種,每轉(zhuǎn)種3代作一次鑒定,并有詳細(xì)記錄卡,包括菌種名稱、編號(hào)、來源、保存日期、傳代情況等。
    (2)實(shí)驗(yàn)室保存菌株不得擅自處理或帶出實(shí)驗(yàn)室,如確需要帶離實(shí)驗(yàn)室,須經(jīng)上級(jí)領(lǐng)導(dǎo)批準(zhǔn),并做好詳細(xì)的記錄。
    (3)菌種應(yīng)有專人保管,如遇工作調(diào)動(dòng),應(yīng)及時(shí)做好交接工作。

    二.菌種類型
    (一)標(biāo)準(zhǔn)茵株
    要搞好臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)控,必須保存有一批標(biāo)準(zhǔn)菌株,作為對(duì)儀器、培養(yǎng)基、染色液、試劑和診斷血清的質(zhì)控菌株,也可作為從事細(xì)菌檢驗(yàn)的工作人員熟悉某些菌株的教具。
    1.標(biāo)準(zhǔn)菌株的條件

    (1)形態(tài)、生理、生化及血清學(xué)特性典型,并相當(dāng)穩(wěn)定。
    (2)菌株對(duì)所試藥物產(chǎn)生恒定的抑菌環(huán)和恰當(dāng)?shù)腗IC 值。
    (3)對(duì)測(cè)試項(xiàng)目反應(yīng)敏感。如測(cè)試巧克力瓊脂平板的分離能力,應(yīng)選流感嗜血桿菌或腦膜炎奈瑟菌。
    2.標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源
    (1)ATCC:美國典型菌種保藏中心。
    (2)NCTC:英國國家典型菌種保藏中心。
    (3)(中國)國家菌種保藏中心。
    (4)實(shí)驗(yàn)室分離菌株:實(shí)驗(yàn)室分離菌株必須經(jīng)過嚴(yán)格鑒定,其形態(tài)、生理、生化特征典型,經(jīng)多次傳代,特征恒定,否則不能作為標(biāo)準(zhǔn)菌株。
    (二)臨床菌株
    臨床分離的菌株,可保存幾天、幾星期或根據(jù)需要選擇一些菌株長期保存,以便進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、分析,或用于教學(xué)和研究。

     

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