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    12-氧-植物二烯酸還原酶酶聯免疫分析(ELISA)

    發布時間: 2017/3/17  點擊次數: 969次
    提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大小:
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    試劑盒使用說明書
    本試劑僅供研究使用       
    目的:本試劑盒用于測定相關樣本中12-氧-植物二烯酸還原酶(OPR)含量。
    12-氧-植物二烯酸還原酶(OPR)酶聯免疫分析實驗原理:
       本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中12-氧-植物二烯酸還原酶(OPR)水平。用純化的12-氧-植物二烯酸還原酶(OPR)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入12-氧-植物二烯酸還原酶(OPR)抗原,再與HRP標記的12-氧-植物二烯酸還原酶(OPR)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的12-氧-植物二烯酸還原酶(OPR)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中12-氧-植物二烯酸還原酶(OPR)濃度。
    試劑盒組成:

    標本要求: 
    1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
    2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
    操作步驟:
    1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為150ng/L,100ng/L ,50ng/L,25ng/L,12.5ng/L)。
    2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
    3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
    4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
    5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
    6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
    7.溫育:操作同3。
    8.洗滌:操作同5。
    9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
    10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
    11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
    注意事項:
    1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
    2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
    3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
    4.請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
    5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
    6.底物請避光保存。
    7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
    8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
    9.本試劑不同批號組分不得混用。
    10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。
    12-氧-植物二烯酸還原酶(OPR)酶聯免疫分析計算:
    以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,    
    在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD      
    值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋      
    倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標      
    準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值      
    代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      
    倍數,即為樣品的實際濃度。                  
    試劑盒性能:
    1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。
    2.批內與批見應分別小于9%和11%
    檢測范圍:                                              
    6ng/L -200ng/L                                         
    保存條件及有效期:
    1.試劑盒保存:;2-8℃。
    2.有效期:6個月

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