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促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）ELISA試劑盒準(zhǔn)確性
發(fā)布時(shí)間： 2015/10/5 點(diǎn)擊次數(shù)： 836次提 供 商： 研域（上海）化學(xué)試劑有限公司 資料大小： 圖片類型： 下載次數(shù)： 116 次 資料類型： XLS 瀏覽次數(shù)： 836 次 相關(guān)產(chǎn)品： 詳細(xì)介紹： 文件下載 促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）ELISA試劑盒用于測(cè)定猴血清、血漿及相關(guān)液體樣本中促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）含量。
實(shí)驗(yàn)原理
促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中猴促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）水平。用純化的猴促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH），再與HRP標(biāo)記的促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中猴促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）濃度。
·準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。
·靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于10 pg/ml。
·特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
·重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。
促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）ELISA試劑盒操作步驟
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。
為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。