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    elisa試劑盒的實驗操作注意事項

    發布時間: 2016-02-24  點擊次數: 1056次

    elisa試劑盒實驗操作注意事項:
    1、   試劑價格較高,實驗前有任何疑問及實驗中有任何問題請及時與本公司取得,避免造成損失!

    2、   試劑盒應在2~8℃冰箱內儲存,且注意不可凍結。

    3、   請勿使用過期的試劑盒或其中的組件或混用不同批次試劑盒的試劑,以免降低靈敏度。

    4、   0標準品的A450nm<0.6時,表示試劑可能變質,請勿使用;顯色劑變藍,表明已變質,請勿使用。

    5、   將試劑盒內試劑稀釋或者改變其濃度將會影響檢測結果。

    6、   當從冰箱中取出試劑盒進行檢測時,應將試劑盒于室溫(20~26℃)下放置半小時以上,使其溫度回升至室溫。

    7、   試劑盒內的各種試劑在使用前應充分搖勻(酶標物溶液輕搖即可,不可起泡),以確保試劑濃度的均一性。

    8、   微孔條按需使用,將剩余的微孔條立即放入包裝袋中,于2~8℃干燥密封的條件下保存。

    9、   向酶標板微孔中加入試劑或樣品時,為確保操作的一致性,加液時槍頭應垂直懸空至板孔正中央,保證樣液應加至孔中央,動作迅速,避免槍頭接觸孔壁,避免樣液濺到孔壁或濺出微孔,造成不必要的非特異性吸附或損失。特別是加入共同試劑(如酶標抗體),由于可能會用到排槍,該操作尤為重要。

    10、             加樣完畢后,應將酶標板至于振蕩器或用移液器槍頭輕敲,使孔中液體充分混勻,但需注意的是切勿不可將孔中的液體搖出,影響檢測結果。

    11、             樣品前處理注意事項:尿樣,若樣品中出現渾濁或沉淀,可將其至于離心機中適當離心,取其上清液作檢測樣品;肝樣或肉樣,請參照說明書提供的方法進行提取。于水浴鍋中提取時,水浴應始終保持沸騰,若由于其他原因達不到所需溫度(但不得低于85℃),可適當延長提取時間,直至組織樣品明顯變色為止(由紅色變黃褐色或白色),且趁熱進行離心,離心力保持在4000g/r以上以保證上清液澄清。

    12、             如果選擇室溫條件下反應,在整個檢測過程中,應保持溫度在20~26℃之間,同時為了避免反應過程外界環境因素的影響,酶標板上應貼上一層薄膜或置于封閉環境中避光反應;如果選擇37℃條件下反應,建議在水浴鍋中進行,且酶標板上也應貼上一層薄膜,防止試劑的揮發。

    13、             洗板時如果選擇蒸餾水作為洗液,要保證洗滌用水的pH范圍在6~8之間;如果水質較差請選擇試劑盒配備的濃縮洗液稀釋后作為洗液。為了確保洗滌的一致性,建議洗滌時采用專門配置的洗板機,反復洗滌6次,每次洗滌的體積以溢滿微孔為宜(約300μL)。如用其他方法洗板時,請注意操作方法,避免清洗不*或產生交叉污染。

    14、             在加入酶底物液進行顯色時,可向板孔中先加50μL的底物緩沖液,然后再加入50μL的底物液(注意加完后混勻液體),或者將底物緩沖液和底物液充分混勻后(混勻容器應潔凈,現配現用),再向每孔中加入100μL的混合液。

    15、             終止液含有1mol/L硫酸溶液,避免皮膚直接接觸,操作時要注意安全。

    16、             推薦使用高質量的吸頭及移液器,且吸頭不可反復使用(難以清洗干凈)。

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