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    ELISA試劑盒如何做好優化

    發布時間: 2015-08-24  點擊次數: 1082次

    ELISA試劑盒質量保證是一個復雜的過程,許多重要的環節都會影響檢測質量。每一行業產品都有好有壞,由于生產廠家繁多,讓消費者在選擇這一塊有了很大的困擾。

    ELISA試劑盒
    加樣的優化:
    在這一過程中,一般情況下有三次加樣,它們分別是加標本,加酶結合物,加底物。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上強烈振蕩。制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清天然凝固、血塊收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液,再在其加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。一般說來,在5天內測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存。

    ELISA試劑盒包被條件的優化:
    1.包被液的選擇:一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,如果包被的抗原在堿性條件下不穩定的話,也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。
    2.包被濃度的選擇:包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質變化,一般蛋白質的包被濃度為1-5ug/ml,要明確針對特定包被抗原的zui適包被濃度需要通過實驗來確定。
    3.包被溫度的選擇:通常是4-8度條件下放置一個晚上或者37度保溫2小時,我們強烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的保持。
    4.包被抗原的選擇:可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物,由于分子量太小,往往難于直接吸附在酶標板上,一般都先使其與無關蛋白質,比如BSA等偶聯,偶聯物吸附于固相載體上。

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