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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理分析管理
發(fā)布時(shí)間： 2015-03-24 點(diǎn)擊次數(shù)： 2828次Engvall 和Perlmann于1971年應(yīng)用將酶附著于抗原或者抗體，通過化學(xué)反應(yīng)的測(cè)定終產(chǎn)物顏色的方法進(jìn)行了IgG的定量測(cè)定，并命名為"enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）"也就是我們所說的即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)，這種固相酶免疫測(cè)定方法已經(jīng)在科研領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。
ELISA檢測(cè)試劑盒方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定，具有靈敏度高，操作簡單等優(yōu)點(diǎn)，但是在具體實(shí)驗(yàn)過程中影響因素較多，并且要按照嚴(yán)格的說明要求，在臨床檢驗(yàn)中除正常反應(yīng)外，有時(shí)常可見到一些錯(cuò)誤結(jié)果（即假陽性或假陰性結(jié)果）。
引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的原因主要有：①標(biāo)本因素；②試劑因素；③操作因素。本文就標(biāo)本因素對(duì)ELISA測(cè)定的影響做如下討論。
（1）類風(fēng)濕因子
人血清中IgM、IgG型類風(fēng)濕因子（RF）可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標(biāo)記二抗的FC段直接結(jié)合，從而導(dǎo)致假陽性。ELISA檢測(cè)試劑盒解決該情況的辦法是：①用F（ab）2替代完整的IgG；②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性（63℃，10 min）IgG的固相吸附劑處理（將熱變性IgG加入到標(biāo)本稀釋液中同樣有效）；③檢測(cè)抗原時(shí)，可以用2-巰基乙醇等加入到標(biāo)本稀釋液中，使RF降解。
（2）補(bǔ)體
ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標(biāo)記二抗過程中，抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其FC段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)被暴露出來，使C1q 可以將二者連接起來，從而造成假陽性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標(biāo)本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
（3）嗜異性抗體
人類血清中含有能與嚙齒類動(dòng)物（如鼠等）Ig （s） 結(jié)合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來，也能造成假陽性。解決的辦法是：可在標(biāo)本稀釋液中加入過量的動(dòng)物Ig （s） ，但加入量不足或亞類不同時(shí)無效。
（4）嗜靶抗原的自身抗體
抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體，有時(shí)能與靶抗原結(jié)合形成復(fù)合物，在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測(cè)定結(jié)果。為避免以上情況出現(xiàn)，解決的辦法是：測(cè)定前需用理化方法將其解離后再測(cè)定。
（5）醫(yī)源性誘導(dǎo)的抗鼠Ig （s） 抗體
臨床開展的用鼠源性CD3等單克隆抗體治療，用放射性同位素標(biāo)記鼠源性抗體的影像診斷及靶向治療等新技術(shù)，均有可能使這些病人體內(nèi)產(chǎn)生抗鼠抗體；另外，被鼠等嚙齒類動(dòng)物咬傷的病人體內(nèi)也可以產(chǎn)生抗鼠Ig （s） 抗體。這些病人ELISA測(cè)定時(shí)均可產(chǎn)生假陽性。解決的辦法是：測(cè)定抗原時(shí)，在標(biāo)本中加入足量的正常鼠Ig （s） ，從而克服由于上述原因造成的假陽性。
（6）交叉反應(yīng)物質(zhì)
類AFP樣物質(zhì)等，是與靶抗原有交叉反應(yīng)的物質(zhì)。在用多抗測(cè)定抗原時(shí)對(duì)測(cè)定結(jié)果影響不大，但在用單克隆抗體測(cè)定抗原時(shí)，如果交叉抗原決定簇正好是所用單克隆抗體相對(duì)應(yīng)的靶決定簇時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
（7）標(biāo)本中其它成分的影響 血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，ELISA檢測(cè)試劑盒均對(duì)ELISA測(cè)定結(jié)果有干擾作用。